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恒一生物科研技術(shù)團隊已全面推出構建CRISPR/Cas9敲除細胞系服務(wù),并構建了小鼠消化道上皮細胞、小鼠前脂肪細胞、小鼠肝細胞以及豬、奶牛、羊消化道上皮細胞和乳腺上皮細胞等相關(guān)基因敲除的細胞系構建。
CRISPR/Cas9簡(jiǎn)介
CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長(cháng)期演化過(guò)程中形成的一種適應性免疫防御機制,此系統成功被改造為第三代人工核酸內切酶,可對多個(gè)基因同時(shí)編輯和敲除?;蚓庉嬵?lèi)型包括基因定點(diǎn)突變、基因移碼突變、基因定點(diǎn)整合、多位點(diǎn)突變和小片段的缺失。通過(guò)CRISPR/Cas9基因編輯,突變效率高、操作簡(jiǎn)單和成本低,已經(jīng)被廣大研究者應用于基因編輯的研究。目前 CRISPR/Cas9 技術(shù)成功應用于哺乳動(dòng)物細胞、斑馬魚(yú)和小鼠以及細菌的基因組精確修飾,應用最多的領(lǐng)域是基因敲除株系構建和基因敲除動(dòng)物的研究?;蚓庉嫾夹g(shù)指能夠讓科研工作者對自己感興趣的基因進(jìn)行“編輯”,實(shí)現對特定DNA片段的敲除、加入等。自CRISPR/Cas9技術(shù)自問(wèn)世以來(lái),就有著(zhù)其它基因編輯技術(shù)無(wú)可比擬的優(yōu)勢,技術(shù)不斷改進(jìn)后,更被認為能夠在活細胞中最有效、最便捷地“編輯”任何基因。如果想想研究某個(gè)基因的功能,可以對這個(gè)基因上設計多個(gè)gRNA,通過(guò)載體表達相應的序列并結合基因組DNA,從而使Cas酶進(jìn)行有效切割,斷裂的基因組序列通過(guò)非同源末端連接來(lái)修復,然而在修復的的過(guò)程中往往會(huì )產(chǎn)生DNA序列的插入或刪除,造成移碼突變,通過(guò)終止密碼子來(lái)終止基因表達,從而實(shí)現基因敲除。
構建CRISPR/Cas9敲除細胞系案例分析
服務(wù)說(shuō)明:
服務(wù)項目 |
服務(wù)周期(工作日) |
備注 |
細胞基因組提取 |
1 |
|
PCR擴增靶點(diǎn)附近目的基因和測序 |
7-10 |
|
靶基因敲除載體構建 |
10-14 |
|
混合細胞靶基因敲除測序驗證 |
5-7 |
|
陽(yáng)性克隆篩選和驗證 |
21-30 |
|
Western blot(額外服務(wù)) |
7-14 |
|
構建CRISPR/Cas9敲除細胞系服務(wù)流程
客戶(hù)提供:
目標細胞和敲除目的基因
服務(wù)流程:
訂單接收-簽定合同-基因敲除活性檢測-質(zhì)控-發(fā)貨。
如何訂購:
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